雙縮脲試劑

一种用于鉴定蛋白质的分析化学试剂

雙縮脲試劑(英語:Biuret reagent)是一種用於鑑定蛋白質分析化學試劑。它是一個鹼性的含銅試液,呈藍色,由1%強鹼(氫氧化鈉/氫氧化鉀等)、幾滴1%硫酸銅酒石酸鉀鈉配製。當底物中含有肽鍵多肽)時,試液中的銅與多肽配位,配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度,在紫外可見光譜中的波長為540 nm。鑑定反應的靈敏度為5~160 mg/mL。

雙縮脲試劑與多肽形成的配合物。

雙縮脲試劑中真正起作用的是硫酸銅,而氫氧化鉀僅僅是為了提供鹼性環境,因此它可被其他鹼,如氫氧化鈉所代替。向試劑中加入碘化鉀,可延長試劑的使用壽命。

使用方法:先將雙縮脲試劑A(氫氧化鈉溶液)加入組織樣液,振盪均勻(必須營造鹼性環境),再加入雙縮脲試劑B(硫酸銅酒石酸鉀鈉的混合溶液),振盪均勻。如果組織里含有蛋白質,那麼會看到溶液變成紫色。具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產生紫色反應。蛋白質的肽鍵在鹼性溶液中能與Cu2+絡合成紫紅色的絡合物。顏色深淺與蛋白質濃度成正比。

雙縮脲反應特徵色

參見

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參考資料

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